EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（24765）是新一代的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。除了具有陽離子脂質(zhì)體（如：Lipo2000,3000）的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點外，經(jīng)李記生物優(yōu)化處理，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低等特點。

　　EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（24765）產(chǎn)品描述

　　EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（核心成分為線性聚乙烯亞胺，也稱作LPEI），是新一代的轉(zhuǎn)染試劑，帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。除了具有陽離子脂質(zhì)體（如：Lipo2000,3000）的轉(zhuǎn)染效率高，操作簡單，適用范圍廣，重復(fù)性好等特點外，經(jīng)李記生物優(yōu)化處理，還具有在體內(nèi)，轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低等特點。

　　EZ Trans（貨號：C4058L1092）核心成分Polyethylenimine HCl MAX, Linear, Mw 40,000（PEI Max 40,000）, PEI Max 40,000是線性化聚乙烯亞胺PEI 25,000的升級產(chǎn)品，不同之處在于1）*水解（去乙酰化）；2）比PEI25，000的鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；3）含更長連續(xù)性乙烯亞胺（ethyleneimine）片段，其質(zhì)子化氮水平比PEI 25,000提高11%以上。Thomas M，et al（2005）研究數(shù)據(jù)表明，去乙?；腜EI 40,000（Polyethylenimine MAX 40,000）體外質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率提高21倍，小鼠體內(nèi)靶向效率達到10,000倍，肺部特異療效顯示增強1500倍。本品經(jīng)堿中和后，可轉(zhuǎn)化為線性化自由胺（PEI），此時分子量正相當(dāng)于25,000。PEI 23966與PEI 24765在轉(zhuǎn)染不同細胞及DNA時是各有優(yōu)勢，李記生物提供的EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（C4058L1080，C4058L1090）核心成分PEI經(jīng)過優(yōu)化，顯著降低了細胞毒性。

　　EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（24765）使用方法

　　1. 接種細胞：用膠原酶消化細胞并計數(shù)（不建議用*）。轉(zhuǎn)染前 18-24 小時進行細胞的鋪板，以便在轉(zhuǎn)染時，貼壁細胞的密度大約在 80%左右。注：培養(yǎng)液中的血清和抗生素不影響轉(zhuǎn)染效率。

　　2. 準(zhǔn)備 EZ Trans-DNA 復(fù)合物

　　1）轉(zhuǎn)染前將所有試劑置于室溫 10 分鐘。下面，以轉(zhuǎn)染 24 孔板培養(yǎng)皿為例，說明轉(zhuǎn)染的具體方法（如果在別的培養(yǎng)器皿中進行轉(zhuǎn)染，各試劑建議使用量見表 1.：

　　2）將 1 μg 質(zhì)粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。

　　3）將 3 μL EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基，用移液槍吹吸 3-4 次。

　　注： 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液， 不能使用含血清的培養(yǎng)基（ 包括 Opti-MEM） 進行 DNA 和 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑的稀釋！因為 EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

　　4）將稀釋好的 EZ Trans 轉(zhuǎn)染試劑一次性全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒 DNA 中，立即用移液槍吹吸 3-4 次。

　　注： 此混合的順序不能反向進行！

　　5）室溫放置 10-15 分鐘，以形成 EZ Trans-DNA 復(fù)合物。

　　表1：不同培養(yǎng)體積對應(yīng)的待轉(zhuǎn)DNA、EZ Trans、稀釋液用量

　　3.轉(zhuǎn)染細胞

　　1）將上述 80 μL EZ Trans-DNA 轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微渦旋，讓 EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

　　2）在 CO2 培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細胞，轉(zhuǎn)染后 12-18 小時，去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液。（若細胞形態(tài)欠佳，可在轉(zhuǎn)染 3-5h 后，添加 1/2 體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基，在轉(zhuǎn)染 12-18 小時后*去除含 EZ Trans-DNA 復(fù)合物的培養(yǎng)液，用含血清和抗生素的新鮮培養(yǎng)液。）

　　3）轉(zhuǎn)染后zui快 7h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達，可根據(jù)需要在 24-48 小時內(nèi)檢測轉(zhuǎn)染效率。

　　注： 篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株， 可在上述操作后（ 轉(zhuǎn)染細胞 24 小時后） ， 將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（ 將細胞稀釋 10 倍 以上） ， 在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃孵育過夜。 在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下， 約 1——2 周可篩選到耐藥性克隆， 在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

　　EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染液（24765）運輸與保存方法

　　常溫運輸，4℃保存，保質(zhì)期12個月。

　　使用注意事項

　　質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)毒素質(zhì)粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260nm / 280nm比值確定 DNA 純度（比值應(yīng)該在1.8——2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。

　　細胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細胞。„

　　特別提醒

　　1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70——80%。

　　2. 對于接觸抑制敏感的細胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

　　3. 即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。

　　4. 對大多數(shù)細胞來而言，每 1μg DNA 使用 3.0μL EZ Trans試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每 1μg DNA使用 1——4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。

　　EZ Trans轉(zhuǎn)染液用于不同細胞轉(zhuǎn)染時用量參考（以96孔板為例）

　　附：幾種細胞轉(zhuǎn)染方法比較

　　幾種細胞轉(zhuǎn)染方法（試劑）特點比較表