我們做細胞實驗的時候經(jīng)常會碰到細胞抱團的現(xiàn)象,有些時候細胞抱團對我們下一步實驗沒什么影響,但是當影響實驗的時候就簡直抓狂。當檢測細胞克隆形成率、鋪單克隆以及電轉(zhuǎn)等,這時候細胞要是抱團了,得到的結(jié)果基本上都是不可靠的,那么細胞為什么會抱團呢?又該如何避免?接下來讓我們一次性給小伙伴們講清楚吧!
細胞抱團的原因可能有:
1、消化時間控制不當
有些小伙伴不管什么細胞都消化3分鐘左右,然后用手拍打培養(yǎng)瓶使細胞成片脫落,但有些細胞消化不完quan,細胞和細胞之間的連接沒有分開,這個時候就拍打下來很容易造成細胞聚團。
也不可消化過度,圓形的細胞容易聚堆,想要通過后面的步驟吹打分開是很難的!
正確做法:培養(yǎng)前充分了解細胞的特性,可向購買細胞的廠家咨詢,也可在網(wǎng)上查詢確定細胞的最jia消化時間。
2、傳代時操作不當
傳代時細胞吹打不均勻,沒有將細胞團吹散。
吹打太用力造成細胞死亡,細胞死亡釋放的DNA與其他細胞形成黏性的細胞團。
細胞離心速度過大或者離心時間過長。
細胞長的太滿才進行傳代操作。
正確做法:
消化前加入適量緩沖液對細胞進行清洗,清除死亡的細胞團和部分堆疊雜質(zhì)。
消化后吹打時上下左右吹打約10次左右,注意控制力度。
確定細胞正確的離心條件,嚴格按條件執(zhí)行。
細胞匯合度在80%~90%即可傳代。
3、細胞狀態(tài)不好
細胞狀態(tài)不好以及發(fā)生老化也可能造成細胞抱團。
正確做法:及時換液或者傳代,檢查培養(yǎng)體系是否適合細胞。
4、細胞接種不當
細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶/皿時細胞分布不均勻,或者細胞接種密度過高。
正確做法:
細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶后可按倒8字形狀搖勻(即∞)。
但對于像96孔板這種小型培養(yǎng)皿,需要在接種前把細胞混勻,接種后不可再搖,否則很容易全部聚集在孔板的中間。若已經(jīng)接種了發(fā)現(xiàn)不均勻,可用槍頭輕輕吹打混勻。
接種前進行細胞計數(shù),按照正確的接種密度接種。
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展會城市:株洲市展會時間:2025-05-08